HSSP是用大豆密码子改造的10 kD玉米醇溶蛋白基因.在前期研究中,从获得的转基因大豆中筛选到1份单拷贝转基因材料GSDH5.该研究采用染色体步移法获取转基因大豆GSDH5的T-DNA插入位点的左边界旁侧序列,对获得的左边界旁侧序列进行分析,设计特异性引物,建立转基因大豆GSDH5特异性检测方法;采用Real-time PCR检测外源基因在转基因大豆不同组织部位(根、茎、叶、花和种子)中的表达量,采用RT-PCR和Western blot检测外源基因在转录和翻译水平上的遗传稳定性,并对转基因大豆GSDH5中的粗蛋白、含硫氨基酸含量及主要农艺性状进行测定分析,为培育高含硫氨基酸转基因大豆新品种奠定基础.结果表明:(1)分子鉴定显示,外源基因HSSP和筛选标记基因Bar成功整合到受体大豆'东农50'基因组中,且以单拷贝的形式整合到大豆基因组中.(2)HSSP基因成功插入到大豆基因组1号染色体非编码区52873883 bp处.(3)HSSP基因在转基因大豆GSDH5的种子中特异性表达,且在T2～T4代转基因大豆中能够稳定遗传并表达.(4)'东农50'粗蛋白含量在41.53％～43.32％之间,GSDH5粗蛋白含量在40.18％～43.03％之间,两者相比无显著差异;GSDH5种子中硫氨基酸占种子干样的比例为1.35％,占种子蛋白的比例为3.14％,与转基因受体品种'东农50'相比,占比显著升高,分别增加了11％和16％.(5)转基因大豆GSDH5植株与受体品种'东农50'在单株荚数、百粒重、株高、结荚习性、花色、叶形等方面均无显著差异,证明HSSP基因的插入对大豆植株的生长发育无不良影响.研究认为,转基因大豆GSDH5材料具备进一步培育成高含硫氨基酸大豆新品种的潜力.
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