摘要
愈伤组织瞬时转化体系可初步快速地验证基因功能和鉴定相关表型.为提高板栗愈伤组织瞬时转化体系的转化效率和稳定性,并鉴定板栗淀粉合成酶基因的功能,该研究以板栗'燕山红栗'幼胚胚芽诱导形成的愈伤组织为材料,通过不同状态的愈伤组织和表达载体优化板栗愈伤组织瞬时转化体系;并构建板栗淀粉合成关键酶基因CmSS Ⅰ沉默载体,验证CmSS Ⅰ基因在板栗中的功能.结果 表明:(1)愈伤组织可按照体细胞胚起动难易程度划分为胚性愈伤组织(EC E)和胚性愈伤组织早期阶段(EC_D Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),且白色、外表相对分散的胚性早期阶段愈伤(EC_DⅢ)更适合板栗瞬时转化体系.(2)转化材料为胚性愈伤早期阶段(EC_DⅢ)时,RNAi沉默载体pK7GWIWG2(Ⅱ)RR-277的瞬时转化效率高达87.67％.(3)通过最适愈伤组织瞬时转化体系,基因CmSS Ⅰ在转基因愈伤组织中表达显著下调,且沉默CmSS Ⅰ阳性愈伤组织的总淀粉和支链淀粉含量显著降低,直链淀粉变化差异不显著.该研究提高了板栗愈伤组织瞬时转化体系的转化效率和稳定性,证明基因CmSS Ⅰ正调控板栗淀粉的合成,这为板栗基因功能的研究奠定了基础,进一步为分子辅助育种提供了技术平台.
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