摘要
基于霍山石斛转录组数据库,利用染色体步移技术,克隆霍山石斛GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因(DhiG-MDS)及其启动子,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因的组织表达模式及低温处理下的表达,为进一步解析霍山石斛抗寒机制和遗传改良提供理论依据.结果表明:(1)成功克隆获得DhGMDS基因(GenBank登录号MW855573),其cDNA序列为1 134 bp,gDNA序列为1 523 bp,无内含子.(2)序列一致性分析显示,DhGMDS蛋白与黄花石斛(Dendrobium catenatum)的GMDS蛋白序列相似性达到99.03％;系统进化树分析表明,霍山石斛DhGMDS基因与黄花石斛GMDS基因处于同一进化节点上,二者亲缘关系近.(3)启动子序列分析发现,在Dh-GMDS基因上游启动子区含有光、低温、干旱和ABA响应元件,且具有MYB等转录因子识别和结合位点.(4)实时荧光定量PCR分析显示,DhGMDS基因在霍山石斛的花中表达量最高,其次为茎、叶,根中表达量最低;经4℃低温处理72 h后,DhGMDS基因受低温胁迫诱导上调表达,且在低温处理24 h的相对表达量最高,表明DhG-MDS 基因参与了植物逆境响应过程.研究推测,低温对DhiGMDS基因的诱导表达可能依赖于上游MYB转录因子的调控.
基金项目
国家自然科学基金区域联合基金(U19A2009)
安徽省留学人员创新项目择优资助计划(DT1810003)
安徽省教育厅高等学校自然科学研究项目(KJ2019A0453)
安徽省科技厅自然科学研究项目(1908085MH268)
安徽中医药大学教学改革重点项目(2019xjjy_zd020)
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