新麦草IPT基因亚细胞定位、过表达载体构建及鉴定

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中文摘要：为了验证IPT基因在新麦草中的功能,为后续新麦草IPT基因进一步功能验证提供试验材料和理论依据.研究以DT型和ST型的新麦草分蘖节为材料,通过RNA-seq分析和qRT-PCR试验验证IPT的相对表达量并进行GO富集分析,采用PCR法克隆IPT基因,构建1300-cYFP-IPT过表达载体,并进行生物信息学分析;通过烟草瞬时转染法和蛋白质印迹法鉴定IPT蛋白的亚细胞定位及表达情况.结果显示,IPT与tRNA二甲基烯丙基转移酶活性相关,在新麦草分蘖中起上调作用;克隆得到新麦草IPT基因全长,并构建了 1300-cYFP-IPT过表达载体,其开放阅读框(ORF)为1 362 bp;多序列比对与保守结构域分析表明,新麦草IPT蛋白存在PLN02840蛋白保守结构域,与二粒小麦、小麦及硬粒小麦IPT蛋白的亲缘关系较近;蛋白质二级结构预测显示新麦草IPT蛋白二级结构由α-螺旋、延伸链、β-折叠和不规则卷曲组成;分析显示丝氨酸的磷酸化位点最有可能是蛋白发挥功能的潜在磷酸化位点;烟草瞬时转染显示IPT蛋白正常表达,定位于叶绿体中;Western blot结果显示连接载体的目的蛋白IPT正常表达,大小为76.8 kD.研究表明IPT基因在新麦草分蘖过程中上调分蘖数,1300-cYFP-IPT载体可在植株叶绿体中正常表达.

外文标题：Subcellular Localization,Overexpression Vector Construction and Identification of IPT Gene in Psathyrostachys juncea

外文关键词：

Psathyrostachys junceaIPTgene cloningoverexpression vectorsubcellular localizationexpression analysis

作者：

任晓敏、云岚、艾芊、李珍、赵乔、石凤翎

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作者单位：

内蒙古农业大学草原与资源环境学院,呼和浩特 010018

草地资源教育部重点实验室,呼和浩特 010011

中国科学院深圳先进技术研究院,深圳 518055

关键词：

新麦草 IPT 基因克隆过表达载体亚细胞定位表达分析

基金：

国家自然科学基金内蒙古自治区种业创新重大示范工程"揭榜挂帅"项目

项目编号：

318606722022JBGS0040

出版年：

2023

DOI：

10.7606/j.issn.1000-4025.2023.09.1441

西北植物学报

西北农林科技大学,陕西省植物学会

西北植物学报

CSTPCDCSCD北大核心

影响因子：1.031

ISSN：1000-4025

年,卷(期)：2023.43(9)

参考文献量13