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胰岛素样生长因子Ⅱ基因转染骨髓基质细胞后的生物学活性

Biological activities of insulin-like growth factor Ⅱ gene after the transfection into bone marrow stroma cells

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目的:将人胰岛素样生长因子Ⅱ基因的真核表达载体pcDNA3-胰岛素样生长因子Ⅱ,转染兔骨髓基质细胞,使其在该细胞中瞬时表达,并观察该表达载体促进骨髓基质细胞增殖的生物学活性.方法:实验于2004-08/12在解放军总医院骨科研究所完成.①骨髓基质细胞培养:取4周龄雄性新西兰大白兔1只用于骨髓基质细胞提取.培养的第2代细胞用于实验.②基因转染:将人胰岛素样生长因子Ⅱ基因的真核表达载体pcDNA3-胰岛素样生长因子Ⅱ,转染兔骨髓基质细胞,对照组则为空载体pcDNA3.③转染与非转染骨髓基质细胞胰岛素样生长因子ⅡmRNA表达:采用反转录-聚合酶链反应检测.④转染细胞的增殖状况检测:采用四甲基偶氮唑盐法测定各组吸光度(A)值(A值越大表示细胞增殖越强).结果:①转染与非转染骨髓基质细胞胰岛素样生长因子ⅡmRNA表达:琼脂糖凝胶电泳的结果显示,未转染和转染pcDNA3质粒的细胞仅出现内参照β-肌动蛋白的条带,而转染的细胞出现胰岛素样生长因子Ⅱ和β-肌动蛋白的两条带.②转染细胞的增殖状况:24,48,72 h各时间点单纯骨髓基质细胞组和转染胰岛素样生长因子Ⅱ的骨髓基质细胞组细胞增殖均显著高于与对照组(72 h:1.233±0.45,1.575±0.45,0.482±0.04,P＜0.01);转染胰岛素样生长因子Ⅱ的骨髓基质细胞组显著性高于单纯骨髓基质细胞组(P＜0.01).结论:将具有多重生物学效应的胰岛素样生长因子Ⅱ基因转入软骨组织工程最佳种子细胞-骨髓基质细胞,明确胰岛素样生长因子Ⅱ促进骨髓基质细胞增殖分化效应,并初步证实了其促进种子细胞的成骨活性.

肖骏、王岩

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解放军总医院骨科,北京市,100853

胰岛素样生长因子Ⅱ 基因 转染 基因疗法 骨髓细胞

国家高技术研究发展计划(863计划)

2003AA205140

2005

中国组织工程研究
中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社

中国组织工程研究

北大核心
影响因子：1.387
ISSN：2095-4344
年,卷(期)：2005.9(30)
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