首页|36型人腺病毒E4ORF1真核表达载体的构建及其促进前脂肪细胞3T3-L1对葡萄糖利用的作用初探

36型人腺病毒E4ORF1真核表达载体的构建及其促进前脂肪细胞3T3-L1对葡萄糖利用的作用初探

扫码查看
原文链接
  • NETL
  • NSTL
  • 万方数据
  • 维普
目的 通过构建早期基因4开放读码框1(E4ORF1)真核表达载体,探讨E4ORF1蛋白调节前脂肪细胞3T3-L1(小鼠胚胎成纤维细胞)利用葡萄糖的作用.方法 通过分子克隆技术构建pcD-NA3.1-E4ORF1重组质粒,并进行DNA测序鉴定.将前脂肪细胞3T3-L1分为对照组和E4ORF1转染组,检测两组细胞第0、1、2、3天培养基中葡萄糖浓度,利用RT-qPCR和Western-Blot检测两组细胞第0、1、2、3、4天E4ORF1、己糖激酶2(HK2)、糖原合酶1(GYS1)mRNA和蛋白质的表达情况.油红O染色观察两组细胞第0、1、2、3、4天分化及脂质积累情况,检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA和蛋白质的表达情况.结果 成功构建N端带FLAG(DYKDDDDK肽)标签的真核表达载体pcDNA3.1-E4ORF1.与对照组相比,E4ORF1转染组细胞培养基中葡萄糖浓度随培养时间延长下降更快,差异有统计学意义(P<0.01).RT-qPCR和Western-Blot结果显示,与对照组相比,转染组E4ORF1的mRNA和蛋白表达水平均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).E4ORF1转染组的糖酵解关键酶基因HK2和糖原合酶基因GYS1 mRNA和蛋白质的表达均显著上升(P均<0.05).油红O染色显示两组细胞均无成脂分化现象,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN、ACC的mRNA和蛋白表达水平均无显著变化(P>0.05).结论 成功构建pcD-NA3.1-E4ORF1真核表达载体;在前脂肪细胞3T3-L1中,E4ORF1可能通过促进HK2和GYS1的表达,参与细胞对葡萄糖的分解和糖原合成过程,对前脂肪细胞的分化无影响.
Construction of eukaryotic expression vector of human adenovirus type 36 E4ORF1 and its effect on promoting glucoseutilization by 3T3-L1 preadipocytes

王冰丽、陈哲、艾柯代姆·阿卜杜克热木、刘迪晖、赵炳尧、关亚群

展开 >

新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,乌鲁木齐830011

36型人腺病毒 早期基因4开放读码框1 己糖激酶 前脂肪细胞3T3-L1 糖代谢

国家自然科学基金面上项目

81873664

2022

10.3639/j.issn.1009-5551.2022.05.001

新疆医科大学学报
新疆医科大学

新疆医科大学学报

CSTPCD
影响因子：0.76
ISSN：1009-5551
年,卷(期)：2022.45(5)
  • 2