中文摘要： 目的 探讨Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseII,CaMKII)调控原肌球蛋白1(Tropomyosin1,TPM1)在海洛因致心肌细胞节律异常中的作用.方法 提取60只SPF级SD大鼠乳鼠心肌组织,培养原代心肌细胞,根据干预情况分为对照组(Control组)、海洛因处理组(HE组)、海洛因+KN-93处理组(HE+KN-93组).Control组常规条件未作任何处理,HE组100μmol/L海洛因作用24 h,HE+KN-93组100μmol/L海洛因+1μmol/L抑制剂KN-93作用24 h.荧光倒置显微镜观察心肌细胞自发搏动频率的改变;Fluo-4 AM检测各组细胞内Ca2+浓度的变化;串联质谱标记相对定量蛋白质组学筛查差异表达蛋白;Western blotting法检测TPM1、CaMKIIδ型及其T287位点[p-CaMKII(T287)]表达水平.结果 心肌细胞自发搏动频率结果 显示,Control组平均自发搏动频率(126.33±1.52)次/min高于HE组(88.00±2.64)次/min,HE+KN-93组自发搏动频率(110.33±1.52)次/min高于HE组(88.00±2.64)次/min,差异均有统计学意义(P<0.05).Fluo-4 AM检测结果 显示,HE组心肌细胞内Ca2+浓度与Control组比较显著增加(P<0.05);HE+KN-93组细胞内Ca2+浓度与HE组比较显著下降(P<0.05).串联质谱标记相对定量蛋白质组学结果 显示,HE组与Control组共筛选出784个差异表达蛋白质,其中上调差异表达蛋白质有442个,下调差异表达蛋白质有342个;HE组与HE+KN-93组共筛选出346个差异表达蛋白质,其中上调差异表达蛋白质有169个,下调差异表达蛋白质有177个.Western blotting结果 显示,HE组p-CaMKⅡ(T287)、TPM1蛋白相对表达量与Control组比较,均显著增加(P<0.05);HE+KN-93组p-CaMKⅡ(T287)、TPM1蛋白相对表达量与HE组比较均降低(P<0.05);3组CaMKIIδ蛋白相对表达量均无统计学意义(P>0.05).结论 海洛因可造成心肌细胞节律异常改变,其机制可能与CaMKII激活后上调TPM1蛋白有关,这有望为临床上因海洛因导致的心律失常患者提供新的诊疗方向.
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