新疆医科大学学报2023，Vol.46Issue(1) ：56-62.DOI:10.3969/j.issn.1009-5551.2023.01.009

FOXO4过表达慢病毒载体构建及顺铂耐药稳定细胞株的建立

Construction of FOXO4 overexpressing lentivirus vector and establishment of cisplatin resistance stable cell line

尹秋玉 朱雅婷 许文婷 欧江华
新疆医科大学学报2023，Vol.46Issue(1) ：56-62.DOI:10.3969/j.issn.1009-5551.2023.01.009
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FOXO4过表达慢病毒载体构建及顺铂耐药稳定细胞株的建立

Construction of FOXO4 overexpressing lentivirus vector and establishment of cisplatin resistance stable cell line

尹秋玉 1朱雅婷 2许文婷 3欧江华3
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作者信息

  • 1. 新疆医科大学,乌鲁木齐 830017
  • 2. 新疆医科大学附属肿瘤医院药学部,乌鲁木齐 830000
  • 3. 新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科,乌鲁木齐 830000
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摘要

目的 构建稳定过表达叉头框基因O4(FOXO4)的顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP,探讨FOXO4在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞顺铂耐药中的作用,为改善TNBC顺铂耐药提供理论基础.方法 通过药物剂量递增法诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231获得顺铂耐药性,CCK-8法确定细胞的耐药指数.将目的基因FOXO4定向插入载体质粒GV492中构建重组慢病毒表达载体LV-FOXO4-OERNA.通过预实验选取助感液类型、确定感染的最佳转染复数值(MOI)以及嘌呤霉素筛选的最佳浓度.将重组慢病毒表达载体感染MDA-MB-231/DDP细胞,嘌呤霉素最佳浓度筛选FOXO4过表达细胞株(FOXO4-OERNA组).qRT-PCR和Western blotting检测目的基因表达情况,测定不同组IC50确定细胞对顺铂敏感性.结果 成功建立乳腺癌顺铂耐药细胞株(耐药指数=5.231).与亲本细胞株相比,MDA-MB-231/DDP耐药细胞株FOXO4 mRNA表达水平显著降低(P<0.05).通过基因测序证明,序列与预计序列一致,重组慢病毒表达载体构建成功,通过嘌呤霉素成功筛选出FOXO4稳定表达株.通过过表达FOXO4可以降低MDA-MB-231细胞对顺铂的耐药性,FOXO4-OERNA组耐药指数(RI=3.063),逆转指数达到1.708.结论 通过药物剂量递增法可建立MDA-MB-231顺铂耐药细胞株,过表达FOXO4可逆转MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的耐药性.

关键词

FOXO4/慢病毒转染/乳腺癌/顺铂耐药

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基金项目

新疆维吾尔自治区高校科研计划(XJEDU2020I014)

出版年

2023
新疆医科大学学报
新疆医科大学

新疆医科大学学报

CSTPCD
影响因子：0.76
ISSN：1009-5551
参考文献量20
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