摘要
目的 通过体外实验探讨山奈酚(Ka)对氯化铜(CuCl2)诱导的A53T突变性人源α-synuclein转基因神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的预防作用.方法 CCK8法测定CuCl2的半数抑制浓度(IC50)值,确定染毒浓度.将实验分为对照组、CuCl2处理组(简称模型组)和CuCl2处理前用Ka干预组(简称干预组).将细胞以5000个/孔接种到96孔板孵育,24 h后在干预组的培养基中加入30μmoL/L Ka预孵育2 h,2 h后在模型组和干预组中加入含有Cu2+的培养基,24 h后进行实验.采用酶联免疫吸附测定和免疫印迹实验检测山奈酚对Cu2+干预后细胞乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)、ATP水平和细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)表达的影响.结果 CuCl2 IC50值为117.7μmoL/L,本研究以接近1/2 IC50值为染毒浓度.通过酶联免疫吸附测定结果显示,染毒和干预24 h后,与对照组相比,模型组的LDH(P<0.001)和ROS(P<0.001)含量均增加,ATP(P<0.05)水平下降,Bcl-2(P<0.05)蛋白表达减弱、Bax(P<0.05)蛋白表达增强;Ka预先保护2 h后,与模型组相比,干预组的LDH(P<0.01)和ROS(P<0.001)含量均减少,Bcl-2(P<0.05)蛋白表达增强、Bax(P<0.05)蛋白表达减弱.结论 Cu2+诱导的细胞ATP生成减少与细胞内过氧化水平增加有关,进而引发了细胞凋亡,而山奈酚预先干预可以避免Cu2+诱导的细胞损伤,表现出对细胞的预防性保护作用.
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