摘要
目的 综合比较 95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取多房棘球绦虫虫体基因组DNA的质量差异,筛选出适用于PCR鉴定多房棘球绦虫线粒体DNA分型的DNA提取方法.方法 无菌条件下取适量多房棘球绦虫原头节(Protoscoleces,PSCs)、囊壁组织样本为实验材料,分别采用 95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取虫体样本中的基因组 DNA,检测其浓度与A260/A280 比值,并以提取的DNA为模板,通过PCR扩增多房棘球绦虫核基因延伸蛋白样蛋白(Ezrin/radixin/moesin-like protein,elp)和线粒体基因细胞色素 b(Cytochrome b,cob)、NADH脱氢酶亚基 2(NADH dehydrogenase subunit 2,nad2)和细胞色素 c 氧化酶亚基 I(Cytochrome c oxidase subunit 1,cox1)的片段,综合比较 3 种方法提取的基因组DNA扩增效果.结果 3 种方法均可从PSCs中提取出基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳和核酸定量结果显示离心柱法提取的基因组DNA A260/A280 比值最高,差异具有统计学意义(P＜0.01),且在加样模板总量一致的情况下,以离心柱法提取的PSCs DNA为模板扩增的cob、nad2 和cox1 基因产物电泳条带清晰、明亮,片段长度准确;而使用 95℃水浴法和碱裂解法提取的PSCs 基因组DNA 仅有效扩增出cob 基因条带.通过离心柱法提取的囊壁组织 DNA 为模板仅扩增出elp 基因片段,小鼠组织基因组DNA未扩增出任何虫体的目的基因片段.结论 使用离心柱法从多房棘球绦虫 PSCs 中提取的基因组DNA质量最佳,能够有效扩增出虫体线粒体基因片段,且无宿主来源细胞的污染,可满足后续实验室对多房棘球绦虫不同虫株的基因型鉴定研究.
基金项目
新疆维吾尔自治区天山青年计划杰出青年科技人才项目(2020Q007)
国家自然科学基金(82160397)
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