摘要
目的 探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)联合万古霉素(Vancomycin,VA)对体外建立的耐甲氧金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)生物膜的影响.方法 (1)以实验室标准菌株耐甲氧金黄色葡萄球菌(BAA-1556,ATCC)作为研究对象,通过结晶紫染色法,确定其最大面积生物膜生成时间.(2)建立实验分组,分别为空白对照组、万古霉素组、乙酰半胱氨酸组、万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组、万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组.通过结晶紫染色法评价生物膜相对面积大小.通过LB-琼脂培养板计数法测算生物膜内残余细菌数量.通过扫描电镜以及激光共聚焦显微镜下观察不同组MRSA细菌生物膜形态变化.结果 (1)MRSA菌在48 h可形成成熟的生物膜结构.(2)MRSA菌在各分组载体表面形成生物膜的半定量结果(波长=590 nm)分别为空白对照组1.32±0.60,万古霉素组1.05±0.15,乙酰半胱氨酸组0.53±0.20,万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组0.35±0.11,万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组0.29±0.10.证实NAC可显著减少生物膜面积.(3)24、48、72 h时间段生物膜内残余细菌量为空白对照组＞乙酰半胱氨酸组＞万古霉素组＞万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组＞万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).证实VA与NAC联合应用可以提高生物膜内细菌的清除率.(4)空白对照组存在大量活/死细菌共同构成的细菌生物膜;乙酰半胱氨酸组虽有较多活菌分布,但死菌黏附以及生物膜面积明显减少;万古霉素组存在着大量死菌黏附于载体表面,构成生物膜,与部分活菌共存;万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组活/死细菌分布明显减少;万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组生物膜面积极少,仅有少量活菌黏附于载体表面,且呈单个分布.结论 NAC对体外生成的MRSA菌生物膜有着清除作用,与VA联合应用可显著提升对生物膜内细菌的清除率.
基金项目
新疆维吾尔自治区重大科技专项项目(2022A03011)
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