摘要
目的 探讨自噬相关基因 2(Autophagy-related gene 2,Atg2)对人骨肉瘤 U2 OS细胞增殖和迁移的影响.方法 蛋白质免疫印迹法鉴定两组细胞,即腺病毒介导 CRISPR/Cas9 系统靶向剪切AAVS1 位点的基因未敲除组(AAVS1 细胞)和Atg2ab 基因双敲除组(Atg2ab DKO 细胞);细胞划痕实验和Transwell小室法检测两组细胞的迁移能力;CCK-8 法和细胞平板克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力.结果 Atg2ab DKO 细胞在 24、48 及 72 h 的光密度值(OD值)均较对照AAVS1 细胞有所降低,但在 72 h时,两种细胞的OD值差异有统计学意义(P<0.01).Atg2ab DKO 细胞形成的克隆数量少于对照组 AAVS1 细胞(6.33±2.31 vs 15.00±1.00),差异有统计学意义(P<0.01).Atg2ab DKO 细胞创面愈合率(0.22±0.05)%显著低于对照组AAVS1 细胞(0.82±0.05)%,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组 AAVS1 细胞相比,Atg2ab DKO 细胞穿过 Transwell 小室的细胞数量显著减少(308.11±64.68 vs 79.78±48.95)(P<0.01).结论 Atg2 基因敲除有效抑制 U2 OS 细胞的迁移和增殖等生物学功能,Atg2 基因可能在人骨肉瘤发展中发挥重要作用.
基金项目
新疆维吾尔自治区自然科学基金(2020D01C180)
国家自然科学基金地区科学基金(31860316)