忽地笑Raised Secondary Lateral Veins(RSLV)突变体平行脉间横向二级侧脉显著凸起,生长不良,雄蕊完全退化.本研究利用表达型噬菌体载体ZAP构建了野生型和突变体忽地笑叶片cDNA文库,分别随机挑取cDNA克隆进行5'端测序,共得到3,122条有效ESTs.利用这些ESTs序列,选择非冗余基因,设计512条70mer的特异性序列为寡核苷酸探针,制作芯片,对忽地笑野生型和突变体叶器官进行基因表达谱分析.进一步采用实时定量PCR技术验证芯片实验结果,最终确定所检测的基因中,有5个基因在突变型和野生型间表达差异显著,分别是韧皮部蛋白2(phloemprotein 2,PP2)、铁蛋白(ferritin)、果胶甲酯酶(pectinmethyl esterases,PMEs),以及叶绿素a/b结合蛋白和丙酮酸脱羧酶等.克隆获得了其全长cDNA,并探讨了这些差异基因与忽地笑突变型形成的可能关系.
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