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黄萎病菌诱导的海岛棉抗病反应的SSH文库构建及分析

Construction and Analysis of SSH Library of Gossypium barbadense upon Infection with Verticillium dahliae

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在Pima 90幼苗接种黄萎病病原菌后2、4、8、12、24、48、72和96 h分批取幼根以抽提棉花总RNA.以未接种病原的棉花cDNA为驱动方,利用SSH法对接种病原后的棉花cDNA进行差减杂交.对杂交后的cDNA进行T/A克隆并转化到大肠杆菌中完成文库构建,共获得了534个克隆.以M13引物对扩增插入片段进行PCR扩增,电泳结果显示插入片段大小从0.2～1.2 kb不等,平均大小为0.5 kb.将克隆中的插入片段点种于尼龙膜上,分别以病原诱导前后的总cDNA为探针进行反向Northern杂交.对78个在海岛棉的抗病反应中呈上升表达的克隆进行了测序并对测序结果去载体后在NCBI上利用Blastn和Blastx进行序列相似性分析.结果表明,大部分阳性克隆与拟南芥等多个物种不同逆境条件下诱导的相关基因或表达序列相同或同源,如棉花病程相关蛋白家族10,拟南芥抗病反应家族蛋白等.SSH文库的构建和分析将有助于了解棉花抗黄萎病反应的分子机制.

朱龙付、涂礼莉、张献龙、聂以春、郭小平、夏启中

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华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,武汉,430070

海岛棉 黄萎病 抑制差减杂交 抗病反应 基因

国家转基因植物研究和产业化专项基金国家高技术研究发展计划(863计划)

JY03-13-032001AA211121

2005

遗传学报
中国遗传学会 中国科学院遗传与发育生物学研究所

遗传学报

CSCD北大核心
影响因子：0.821
ISSN：1673-8527
年,卷(期)：2005.32(5)
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