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稳定表达ATP5a细胞系的建立

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目的:通过慢病毒表达系统构建稳定表达ATP5a蛋白的猪回肠上皮细胞IPI-2I细胞系，筛选获得过表达ATP5a的稳定细胞株，为研究ATP5a介导的生物学功能在病毒复制中的作用提供细胞模型。方法:提取HEK 293细胞的cDNA为模版，通过PCR扩增将ATP5a基因克隆入慢病毒载体中，获得重组质粒pLVX-ATP5a-IRES-ZsGReen1，利用慢病毒包装系统将重组质粒与辅助质粒PSPAI2、PMG 2。0按照3∶2∶1共转染293T细胞，48 h后收集细胞上清获得稳定表达ATP5a蛋白的慢病毒颗粒，将重组慢病毒颗粒感染IPI-2I细胞，利用流式筛选技术获得阳性细胞，通过West-ern Blotting验证ATP5a的表达。结果:成功构建ATP5a过表达慢病毒载体，并通过倒置荧光显微镜观察显示获得纯度高于90％的稳定表达细胞株，Western Blotting结果显示ATP5a蛋白可在细胞系中稳定表达。结论:本研究成功建立了稳定表达ATP5a蛋白IPI-2I稳定表达细胞系，为ATP5a蛋白生物学特性研究奠定了基础。

闫浩鑫、李明蔚、吴洋、郭龙军、冯力

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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆 163000

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150069

ATP5a 细胞系 稳定表达 IPI-2I

黑龙江省自然科学基金

YQ2020C023

2024

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2024.01.021

畜牧兽医科技信息
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

畜牧兽医科技信息

影响因子：0.124
ISSN：1671-6027
年,卷(期)：2024.(1)
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