摘要
研究目的:骨肉瘤(OS)患者应用靶向抑制DNA-PKcs增敏NVP-BEZ235的临床作用.研究意义:明确NVP抗OS的作用及分子机制,初步探讨NVP的抵抗因子(DNA-PKcs),为进一步开发NVP-BEZ235抗OS提供实验基础和理论依据.研究内容:①明确NVP-BEZ235激活ER stress通路诱导OS细胞凋亡的作用及分子机制;②裸鼠体外和体内实验:运用ER stress抑制剂Salubrinal、Caspase-12抑制剂Z-ATAD-fmk或CHOP siRNA等手段来阻断ER stress活化,腹腔注射ER stress抑制剂Salubrinal或用CHOP-shRNA稳转U2OS细胞株建立裸鼠荷瘤模型,进一步证实DNA-PKcs是OS细胞对NVP-BEZ235抵抗的主要分子,解析DNA-PKcs抗NVP-BEZ235诱导OS细胞凋亡的分子机制.从抑制AKT Ser473磷酸化、诱导DNA损伤及易化ER stress三个方面解析DNA-PKcs抑制后增敏NVP-BEZ235的分子机制;用免疫印迹(Western blotting,WB),免疫组化(immunohistochemistry,IHC)及实时定量PCR等方法检测人OS组织及周边正常骨组织中DNA-PKcs、p-AKT(Ser-473)的表达水平及相互关系.
基金项目
沧州市中心医院2020年度院级课题(2020017)
NETL
NSTL
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