医学信息(下旬刊)2011，Vol.24Issue(4) ：1-2.

Smad4真核表达质粒的构建及稳定转染MKN28细胞系的建立

Construction of eukaryotic expressing plasmid of human Smad4 and establishment of stably transfected MKN28 cell line

周红 程时丹
医学信息(下旬刊)2011，Vol.24Issue(4) ：1-2.
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Smad4真核表达质粒的构建及稳定转染MKN28细胞系的建立

Construction of eukaryotic expressing plasmid of human Smad4 and establishment of stably transfected MKN28 cell line

周红 1程时丹2
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作者信息

  • 1. 201700,上海复旦大学附属中山医院青浦分院
  • 2. 2200025,上海交通大学医学院附属瑞金医院
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摘要

构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-Smad4,通过稳定转染建立高效表达Smad4的人胃癌细胞系.利用PCR扩增出人Smad4全长基因的cDNA编码区序列,使用基因重组技术将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组表达质粒pcDNA3.1-Smad4.双酶切及测序鉴定后,利用脂质体法将其转染入人胃癌MKN28细胞,G418加压筛选后得到阳性克隆.通过流式细胞术、免疫荧光及Western blot检测Smad4在细胞系中的表达情况.经测序及双酶切鉴定,pcDNA3.1-Smad4真核表达载体pcDNA3.1(-)-Smad4构建重组质粒构建正确,稳定转染人Smad4的MKN28细胞系.结论:建立的稳定转染人Smad4的MKN28细胞系能够高效表达Smad4基因,为进一步研究Smad4在人胃癌中的作用机制奠定了基础,为胃癌的基因治疗提供了潜在靶点.

关键词

Smad4/稳定转染/肿瘤基因治疗

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出版年

2011
医学信息(下旬刊)
中华中药学会中医美容分会 陕西文博生物信息研究所

医学信息(下旬刊)

ISSN：1006-1959
参考文献量6
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