摘要
目的:建立D-半乳糖(D-gal)致体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞(MSFs)损伤模型,为研究增生性瘢痕和皮肤衰老等提供实验依据.方法:原代培养KM乳鼠皮肤成纤维细胞,先用免疫细胞化学技术(SABC)法特异染色波形蛋白作细胞鉴定,然后采用10g/L的D-gal作用于细胞,培养一定时间制作MSFs损伤模型.苏木精-伊红(HE)染色观察MSFs形态变化;四甲基氮唑兰(MTT)法测定MSFs活性;试剂盒法检测MSFs培养液中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性;β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色观察模型细胞的酶活性.结果:经SABC法特异鉴定培养细胞为MSFs,D-gal处理细胞24h后,与正常对照组比较,MSFs形态发生显著变化,MSFs活性明显下降;MSFs的SOD活力明显下降(P＜0.01),而MDA含量和LDH活性显著上升(P＜0.01);模型细胞培养72h后,β-Gal活性增高.结论:浓度为10g/L的D-gal作用MSFs 24 h后,对细胞具有明显氧化损伤作用,且在48 h内模型细胞稳定,72h后模型细胞出现衰老生物学标志.该模型细胞为今后开展相关研究提供了实验细胞平台.
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