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朱顶红实时荧光定量PCR中不同组织器官内参基因的筛选

Selection of Reference Genes for Quantitative Real-Time PCR in Different Tissue and Organ of Barbadoslily

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以朱顶红(Hippeastrum vittatum)不同组织器官为试验材料,通过实时荧光定量PCR技术检测肌动蛋白基因(ACT)、亲环蛋白基因(CYP)、转录延伸因子基因(EF-1a)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH、GAPDH2)、α微管蛋白基因(TUA)和β微管蛋白基因(TUB)这7个常用的看家基因的表达水平,并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper综合评价其表达稳定性.结果表明,EF-1a和GAPDH2的表达水平较高,而且相对稳定;其次为TUB、TUA和GAPDH.geNorm和NormFinder软件分析结果显示,在不同组织器官中CYP和GAPDH2的表达稳定性最高,其次是EF-1a;进一步分析表明,CYP的表达稳定性虽然较高,但是其表达丰度较低,故不适合作为内参基因.BestKeeper分析表明,EF-1a和GAPDH2在不同组织器官中的表达稳定性较好.综合分析表明,EF-1a和GAPDH2在所有样品中表达量较高,稳定性较好.以筛选出来的EF-1a、GAPDH2以及EF-1a+GAPDH2作为内参基因检测朱顶红花器官调控基因PI的表达水平,结果表明,以上述两个基因及其组合为内参基因得到的PI表达模式相同,而且在花器官中的表达高于茎盘和根,基本符合PI调控花模型的机理.因此,EF-1a、GAPDH2或EF-1a+ GAPDH2可作为朱顶红的内参基因进行相关基因的表达调控研究.

刘晓婷、王顺利、薛璟祺、薛玉前、吕英民、张秀新

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北京林业大学园林学院,国家花卉工程技术研究中心,北京100083

中国农业科学院蔬菜花卉研究所,国家花卉改良中心,中国农业科学院牡丹研究中心,农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室,北京100081

朱顶红 实时荧光定量PCR 内参基因 EF-1α GAPDH2

中国农业科学院科技创新工程项目中国科协青年人才托举工程项目

CAAS-ASTIP-IVFCAAS2015QNRC001

2018

10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0780

园艺学报
中国园艺学会 中国农业科学院蔬菜花卉研究所

园艺学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.127
ISSN：0513-353X
年,卷(期)：2018.45(5)
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