摘要
背景与目的:LINC00152是异常表达于肝癌、胃癌及结肠癌等恶性肿瘤中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)之一,参与增殖、迁移及凋亡等生物学行为,观察LINC00152在替莫唑胺(temozolomide,TMZ)诱导脑胶质瘤干细胞(glioblastoma stem cell,GSC)周期阻滞中的作用及其机制.方法:神经干细胞培养液培养脑胶质瘤U251细胞,并提取成球生长的GSC作为研究对象,慢病毒转染法外源性上调模型细胞LINC00152表达水平并以嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞株,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测LINC00152表达水平,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞周期变化,蛋白质印迹法(Western blot)检测P53、Cyclin A、CDC25A及CDK2蛋白水平变化.结果:分离提取的GSC呈球状生长,细胞球CD133和Oct-4呈阳性表达.慢病毒转染明显上调GSC中LINC00152表达水平(P<0.0001).TMZ(200μg·mL-1)处理48 h明显降低GSC活力(P<0.0001),而与空载对照组相比,LINC00152过表达能抵抗TMZ的诱导效应(P<0.0001).TMZ处理48 h明显增加GSC的S期比例(P<0.0001),而与空载对照组相比,LINC00152过表达能抵抗TMZ的诱导效应(P<0.0001).TMZ处理48 h明显下调GSC中Cyclin A、CDC25A、CDK2蛋白表达(P<0.0001),上调P53蛋白表达(P<0.0001);而与空载对照组相比,LINC00152过表达能抵抗TMZ的诱导效应(P<0.0001).结论:LncRNA LINC00152过表达可抑制TMZ诱导的P53蛋白水平上调和CyclinA、CDC25A、CDK2蛋白水平下调,拮抗S期阻滞.
基金项目
2018年沧州市科技计划项目(183302129)
2016年沧州市科技计划项目(162302072)
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