摘要
背景与目的:生物信息学分析提示GATA6是miR-203a-3p的潜在靶基因,明确miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭.方法:采用LipofectamineTMRNAiMAX对培养的KYSE-70和KYSE-180细胞瞬时转染.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-203a-3p和GATA6的表达水平.采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GATA6蛋白的水平.质粒联合转染后检测相对萤光素酶活性.对食管鳞癌患者标本进行恶性肿瘤与异型增生组织miR-203a-3p和GATA6的表达检测.结果:RTFQ-PCR及Western blot检测结果显示,与对照组比较,GATA6基因和蛋白的表达在miR-203a-3p转染组中降低,在miR-203a-3p inhibitor组却升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,miR-203a-3p转染组KYSE-70细胞增殖能力下降,miR-203a-3p inhibitor组中却升高,差异均有统计学意义(P<0.05).在KYSE-180中虽然差异无统计学意义,但其趋势却与KYSE-70一致.与对照组比较,在KYSE-70和KYSE-180细胞系中,侵袭细胞数值/视野在miR-203a-3p转染组中均明显下降(P<0.01),在miR-203a-3p inhibitor组中却明显升高(P<0.05).与miR-203a-3p掠夺型+GATA6野生型组和miR-203a-3p野生型+GATA6突变型组比较,相对萤光素酶活性在miR-203a-3p野生型+GATA6野生型组中降低,差异有统计学意义(P<0.05).与异型增生组织相比较,100％(10/10)食管鳞癌患者miR-203a-3p在恶性肿瘤组织的表达下调,而GATA6表达水平上调.结论:miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭能力.
基金项目
中国国家留学基金管理委员会2016年地方合作项目(留金法 [2016]5113号)
中国国家留学基金管理委员会2016年地方合作项目(201608420206)
湖北民族学院博士启动基金(鄂民院科技字 [2014]8号)
湖北民族学院博士启动基金(MY2014B021)
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