摘要
背景 与目的:PRUNE2是成神经细胞瘤的一个特异性预后相关基因,在调节成神经细胞瘤的细胞分化、增殖和侵袭方面发挥着重要作用.PRUNE2低表达与前列腺癌的不良预后密切相关.探讨PRUNE2点突变对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法:通过构建PRUNE2基因野生型和突变型过表达的重组载体并将其转染到DU145细胞中构建相应稳转株.利用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验和克隆形成实验检测细胞恶性增殖能力,通过细胞凋亡实验检测细胞凋亡能力,采用transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力.采用蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白的表达水平,通过免疫荧光和免疫共沉淀实验检测蛋白之间的相互作用.结果:转染突变型PRUNE2 E370K基因的DU145细胞恶性增殖、侵袭和迁移能力均较对照组显著增强,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).PRUNE2与RhoA之间可以相互结合,但是PRUNE2 E370K突变体与RhoA之间的相关作用明显减弱.同时,PRUNE2 E370K突变体促进Rho通路下游ROCK蛋白和FAK蛋白的表达,促进与细胞增殖相关的Bcl-2和cyclin D1蛋白的表达,同时抑制与侵袭、迁移相关抑制蛋白E-cadherin的表达.结论:前列腺癌DU145细胞中PRUNE2基因点突变可以促进细胞增殖、侵袭和迁移,并抑制细胞凋亡.
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