摘要
背景 与目的:研究表明,与肥胖症密切相关的源自脂肪细胞的细胞因子瘦素(leptin)在癌变和肿瘤发生中起着重要作用.通过体外实验观察leptin对人胆囊癌细胞系GBC-SD和OCUG侵袭和迁移能力的影响,探讨其可能的作用机制.方法:将胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞分为对照组和实验组.实验组利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术靶向沉默胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞的leptin表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测转染效率,通过细胞划痕实验和transwell小室法检测胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞的迁移和侵袭能力,采用免疫荧光和免疫细胞化学实验检测siRNA干扰后胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞的leptin蛋白水平,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测干扰后GBC-SD和OCUG细胞的leptin和p-AKT蛋白表达.结果:细胞划痕实验结果显示,利用siRNA靶向沉默leptin后GBC-SD和OCUG细胞的迁移能力下降(t=26.614,P<0.01;t=19.338,P<0.01).Transwell迁移实验结果显示,利用siRNA靶向沉默leptin后GBC-SD和OCUG细胞的迁移能力也下降(t=7.185,P=0.002;t=8.889,P=0.003).Transwell侵袭实验结果显示,干扰后GBC-SD和OCUG细胞的侵袭能力下降(t=10.183,P=0.001;t=9.697,P=0.001).免疫荧光和免疫细胞化学实验结果显示,干扰后GBC-SD和OCUG细胞的leptin蛋白表达下降,Western blot检测结果表明,靶向沉默GBC-SD细胞后leptin和p-AKT蛋白表达下调(t=26.463,P<0.01;t=13.904,P<0.01),靶向沉默OCUG细胞后leptin和p-AKT蛋白表达也下调(t=21.335,P<0.01;t=17.914,P<0.01).结论:下调GBC-SD和OCUG细胞的leptin表达可抑制细胞侵袭和转移能力,并可能通过AKT信号通路调控胆囊癌细胞的侵袭和迁移.Leptin有望成为胆囊癌治疗的一个重要靶点.
基金项目
云南省科技厅基础研究面上项目(202001AT070018)
国家自然科学基金(81760430)
云南省医学学科后备人才项目(H-2017037)
云南省卫生计生委医学学科带头人培养计划(D-201658)
云南省科技惠民专项(2016RA011)
云南省科技计划-科技入滇专项(2018IB007)
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