摘要
背景 与目的:目前卵巢癌的治疗方式仍是手术及术后辅助铂类药物为主的化疗,但复发率高,容易耐药.前期研究已证实血小板活化因子受体(platelet-activating factor receptor,PAFR)在上皮性卵巢癌中高表达,且能促进卵巢癌细胞增殖、侵袭及转移.探索顺铂(cisplatin,CDDP)作用后卵巢癌细胞中PAFR的表达变化及其对卵巢癌细胞CDDP敏感性的影响,并对其机制进行初步探讨,旨在为卵巢癌靶向治疗及克服CDDP耐药提供新方法.方法:采用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测不同浓度的CDDP作用于卵巢癌细胞株(SKOV-3和CAOV-3)不同时间后各组细胞PAFR的表达情况.采用Western blot及免疫荧光法验证CDDP作用于卵巢癌细胞后核因子κB(nuclear factor Kappa-B,NF-κB)/p65及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达.采用Western blot及RTFQ-PCR检测小RNA干扰沉默NF-κB及HIF-1α后PAFR的表达情况.采用细胞增殖和凋亡实验检测抑制PAFR表达后对卵巢癌细胞CDDP敏感性的影响.采用Western blot验证CDDP和(或)PAFR抑制剂作用细胞后下游信号通路关键分子P70S6K/AKT/ERK的变化情况.结果:CDDP能够引起卵巢癌细胞中PAFR表达升高,并呈现剂量及时间依赖性(P<0.01).CDDP能够引起转录因子NF-κB及HIF-1α的核聚集,沉默NF-κB及HIF-1α后,CDDP诱导的PAFR表达下降.PAFR特异性小分子拮抗剂WEB2086或RNA干扰抑制PAFR表达均能显著提高卵巢癌细胞对于CDDP的敏感性,即细胞增殖能力明显降低(P<0.01),而凋亡率明显升高(P<0.01).CDDP作用于卵巢癌细胞后,表达升高的PAFR能够激活下游的AKT及ERK信号通路分子.结论:CDDP作用于卵巢癌细胞后能够引起转录因子NF-κB及HIF-1α的核聚集从而上调PAFR的表达.抑制PAFR表达能够增加卵巢癌细胞对CDDP的敏感性,可能成为卵巢癌靶向治疗的新方法.
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