摘要
背景与目的:传统前列腺癌皮下移植瘤模型的建立采取细胞悬液注射方式,但该方式存在较大局限性.探索利用细胞膜片技术构建新型前列腺癌皮下移植瘤动物模型的可行性.方法:将人前列腺癌细胞系DU145接种至35 mm温度敏感性细胞培养皿中,连续培养制备前列腺癌细胞膜片,并采用H-E染色和免疫组织化学方法鉴定.根据研究目的,设置细胞悬液组和细胞膜片组,细胞悬液组在BALB/c裸小鼠皮下注射DU145细胞悬液,细胞膜片组在裸小鼠皮下注射DU145细胞膜片.移植后4周处死裸小鼠,剥离两组移植瘤作进一步组织学分析,包括胶原纤维含量、局部浸润及血管生成情况.同时,解剖前列腺癌常见的转移脏器,如骨、肺和肝脏等,评估两组的全身转移情况.结果:培养1周后可制备前列腺癌DU145细胞膜片,大体观察呈现半透明胶质薄片,具备较好的组织学强度.组织学染色见膜片状结构,平均厚度约为(32.6±?7.5)μm.DU145细胞标志物vimentin高表达,E-cadherin低表达,胶原纤维含量丰富,在膜片中高表达.皮下移植4周后,H-E染色显示,细胞膜片组肿瘤结构致密,有明显周围肌肉浸润,而细胞悬液组肿瘤存在较多空泡,与周围组织边界清楚.皮下移植4周后,细胞膜片组移植瘤体积明显大于细胞悬液组,两组测量肿瘤体积分别为(0.967±0.129)和(0.437±0.054)cm3(t=3.774,P=0.0195).马松染色显示,细胞膜片组蓝色胶原纤维含量明显高于细胞悬液组,两组吸光度(D)值分别为0.0230±0.0011和0.0140±0.0007(t=7.022,P=0.0001).CD31免疫组织化学染色表明,在200倍显微镜视野下细胞膜片组和细胞悬液组移植瘤组织中微血管密度分别为53.20±3.56和32.40±4.98(t=3.392,P=0.0095).皮下移植4周后,两组通过大体解剖和H-E染色均未见到明显的全身转移病灶.结论:利用细胞膜片技术构建前列腺癌皮下移植瘤动物模型具备可行性和一定优势,与传统细胞悬液注射方式相比,成瘤体积更大,与周围组织浸润程度更深,新生微血管密度更高,胶原含量丰富,更有助于揭示前列腺癌真实的生物学特征,有望应用于前列腺癌分子遗传学研究、肿瘤耐药机制及新药研发等领域.
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