摘要
近年来,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)已成为干细胞领域的研究热点,其不仅支持造血系统,还可在特定的培养条件下向多种组织细胞分化.人胎盘来源的MSC取材容易.该研究比较不同的组织消化酶(Ⅱ型胶原酶与Ⅳ型胶原酶)分离得到的间充质干细胞的特性.通过手术剪剥离胎盘表面羊膜,剪取胎儿侧的绒毛板组织机械破碎后,分别加含胶原酶Ⅱ和Ⅳ的PBS消化液消化,分离为单个核细胞,用含有10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2、95％湿度下培养,48小时后全量换液,去除非贴壁细胞,添加新鲜培养基,当细胞融合90％左右时,胰酶消化传代.通过比较胶原酶Ⅱ和Ⅳ消化得到的原代细胞的总数,后续生长的图片记录,以及通过流式细胞测定使用不同消化酶从绒毛膜中分离得到间充质干细胞的表面标记CD90、CD73、CD105的阳性率情况,比较使用不同消化酶消化胎盘组织分离获得间充质干细胞,并将分离得到的胎盘间充质干细胞进行诱导分化成脂和成骨细胞,来鉴定其干细胞的生物学特性.结果发现消化时间相同,酶浓度相同的,以及摇床转速相同的情况下,使用Ⅱ型胶原酶可以得到更多的单个核细胞,细胞的生长情况较Ⅳ型胶原酶好,若从成本上来比较Ⅱ型胶原酶较Ⅳ胶原酶成本低,所以在生产和实验中可以优选Ⅱ型胶原酶.
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