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人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达

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报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻7120中的表达和鉴定结果. 将质粒pRL-rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL-439质粒上的PpsbA启动子下游,得到中间载体pRL-TC. 进一步与穿梭质粒pDC-8重组,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC-TNF. pRL-rhTNF,pRL-TC和pDC-TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为11.8%, 16.9%和15.0%. 通过三亲接合转移将pDC-TNF引入鱼腥藻7120中并获稳定遗传的转基因株. 从转基因的鱼腥藻7120中检测到pDC-TNF质粒的存在,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应. 抽提转基因藻的蛋白样品进行检测,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应. 采用TNF对L929细胞的细胞毒性方法,证明转基因藻粗提液中,TNF确有细胞毒活性.

刘凤龙、张宏斌、施定基、商之狄、林晨、邵宁、彭国宏、张雪艳、张海霞、吴锦银、王捷、徐旭东、江悦华、钟泽璞、赵树进、吴昊、曾呈奎

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中国科学院植物研究所,北京,100093

广州军区广州总医院医学实验科,广州,510010

中国科学技术大学生物系93级,合肥,230027

中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京,100021

中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室,青岛,266071

美国密执安州立大学国家植物学实验室,EastLansing,Michigan48824-1312

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人肿瘤坏死因子α 鱼腥藻7120 穿梭表达载体 三亲接合转移 Southern和Western 印迹细胞毒活性

国家自然科学基金

39280016

1999

中国科学(生命科学)
中国科学院

中国科学(生命科学)

CSCD
影响因子：0.725
ISSN：1674-7232
年,卷(期)：1999.29(2)
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