摘要
目的:从干预肾间质成纤维细胞的糖酵解角度研究槲皮素(Que)在体内外抗纤维化的作用和机制.方法:体内实验,小鼠分组给药,剖取肾脏,称重并进行组织病理学检查和生化指标检测;体外实验,不同试剂处理大鼠正常肾成纤维细胞(NRK-49F细胞),提取蛋白,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测NRK-49F细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PC-NA)等蛋白的表达情况;采用荧光法考查Que对转化生长因子-β(TGF-β1)和表皮细胞生长因子(EGF)诱导的NRK-49F细胞葡萄糖摄取的影响;乳酸检测试剂盒检测不同实验组细胞的乳酸含量;荧光定量PCR法检测Que对TGF-β1和EGF诱导的NRK-49F细胞糖酵解关键酶己糖激酶(HK2)、磷酸果糖激酶1(PFK1)和肌肉丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)的mRNA的影响.结果:与UUO组比较,Que给药组肾脏组织形态结构均有不同程度的缓解,与抑制糖酵解有关,且小鼠血清中尿素氮(BUN)水平和血肌酐(Scr)水平呈现明显的下降趋势;NRK-49F细胞中乳酸生成和葡萄糖摄取量逐渐减少,Que对TGF-β1和EGF诱导的RIF的糖酵解关键酶的mRNA水平逐渐降低,并与PKM2有关.结论:Que能够抑制NRK-49F细胞PKM2酶活性和糖酵解,并减少TGF-β1诱导的肌成纤维细胞活化.
基金项目
蚌埠医学院重大科技培育项目(2020byfy001)
国家自然科学基金面上项目(81973658)
中国博士后基金一等资助项目(2018M640529)
安徽省教育厅优秀青年人才支持计划重点项目(gxyqZD2020027)
蚌埠医学院2021年度研究生科研创新计划108项自筹经费立项项目(Byycxz21033)
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