摘要
目的:探讨左金丸(ZJW)对KRAS突变的人结肠癌细胞西妥昔单抗(CET)抵抗的效果及机制.方法:采用Sanger测序法检测SW620、Lovo、HCT116、HT29和Caco2细胞KRAS基因突变状态;采用CCK-8法检测ZJW、CET、ZJW联合CET以及联合不同细胞死亡抑制剂对上述细胞存活率的影响,并观察ZJW联合CET对KRAS突变型细胞(SW620、Lovo及HCT116)耐药性的影响;流式细胞术、比色法和FerroOrange荧光探针检测和观察ZJW、CET以及它们联合作用对KRAS突变型细胞内ROS、GSH及Fe2+水平的影响;Western blot和Real-time PCR法检测ZJW 联合CET对铁死亡相关通路蛋白和mRNA的调控作用.结果:KRAS突变型细胞为 HCT116(KRASG13D),Lovo(KRASG13D),SW620(KRASG12V),KRAS 野生型细胞为 HT29 和 Ca-co2;与125 μg/mL CET处理组比较,相同浓度CET明显降低KRAS野生型细胞Caco2和HT29的存活率,分别为34.03％和40.68％(P＜0.01);与空白对照组比较,ZJW(50 μg/mL)联合 CET(125 μg/mL)后,HCT116、Lovo和SW620细胞存活率均有显著下降,分别为 59.97％,59.47％,52.58％(P＜0.05);ZJW能够增强KRAS突变细胞内ROS和Fe2+水平,降低GSH水平;当ZJW联合CET后,效果更加显著(P＜0.05,P＜0.01).ZJW 联合 CET 抑制 SW620 细胞 SLC7A11、GPX4、Nrf2、MDM2 蛋白和 mRNA 的表达,增强p53蛋白的表达,但不影响p53 mRNA的水平.结论:ZJW能够调控KRAS突变细胞Nrf2和p53途径从而抑制SLC7A11和GPX4促进铁死亡,可能是逆转CET耐药的机制.
基金项目
国家自然科学基金(81703885)
国家自然科学基金(81874399)
上海中医药大学附属曙光医院四明临床研究专项(SGKJLC-202030)
上海市临床重点专科建设项目(shslczdzk01201)
国家中医药管理局中医肝胆病重点学科慢性肝病虚损重点研究室-上海市中医临床重点实验室项目(20DZ2272200)
国家中医药管理局第四批中医优才项目(2017-124)
上海市科委专项(19401972300)
上海中医药大学研究生创新课程建设项目(2017)()
山东省重点研发计划重大科技创新工程项目(2021CXGC010509)
维普
万方数据