摘要
目的:通过分析新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对黑色素瘤移植瘤模型小鼠mRNA表达谱的影响,探讨GNA治疗黑色素瘤可能的作用机制.方法:体外通过MTT法测细胞存活率和倒置显微镜下观察细胞形态来研究GNA对于黑色素瘤细胞的抑制作用.体内实验中通过对比HE(hematoxylin-eosin)染色和免疫组化(Ki-67)的结果观察GNA对黑色素瘤小鼠移植瘤生长的影响,并记录瘤重和瘤重比.RNA-seq测序技术对GNA中剂量组与模型组进行测序,并对筛选出的mRNA进行GO和KEGG分析,最后利用实时定量荧光PCR验证差异表达基因的筛选结果.结果:不同剂量的GNA作用于黑色素瘤小鼠模型后,模型小鼠的肿瘤组织内出现大面积坏死,肿瘤生长受到明显地抑制.mRNA测序共鉴定出36个差异表达的mRNA,其中30个上调,6个下调,根据GO和KEGG分析的基因组邻接预测mRNA的可能功能.采用实时荧光定量PCR技术进一步验证所选差异mRNA的表达,结果显示Cidec、Mylk4、Ces1d 和 Igkv9-123 的 mRNA 表达上调,Ryr3和Hapln1的mRNA表达下调.结论:GNA可以体内外抑制黑色素瘤细胞的增殖,其机制与调控细胞因 子-细胞因子受体相互作用、NF-κB、MAPK等通路上的mRNA表达有关.
基金项目
安徽高校自然科学研究重点项目(2022AH050529)
安徽中医药大学自然科学研究重点项目(2021zrzd08)
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