摘要
目的:探究肺癌细胞外泌体(exosome,exo)对血管新生的影响及机制.方法:提取人肺上皮细胞HFL-1和人肺癌细胞A549、H522、H460细胞分泌的外泌体,记为HFL-1 exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo,将上述外泌体以及等体积的PBS缓冲液与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,记为HFL-1 exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组和PBS组,PBS组作为对照组.HUVEC转染PTEN siRNA和Negative control,记为si-PTEN组和si-NC组.提取转染miR-NC、miR-718 mimic、miR-718 inhibitor的A549细胞所分泌的外泌体,记为A549/miR-NC exo、A549/miR-718 mimic exo、A549/miR-718 inhibitor exo,将上述外泌体与HU-VEC细胞共孵育,记为A549/miR-NC exo组、A549/miR-718 mimic exo组、A549/miR-718 inhibitor exo组,HUVEC细胞与A549/miR-718 mimic exo孵育后转染PTEN过表达质粒,记为A549/miR-718 mimic exo+PTEN组.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞及外泌体miR-718 的表达;Transwell小室法和小管形成实验检测各组细胞的迁移能力和小管形成情况;Western blot检测PTEN蛋白的表达.结果:本文所提取的HFL-1 exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo均符合外泌体的结构特征;与PBS组比较,A549 exo、H522 exo、H460 exo组HUVEC细胞迁移数和小管形成数显著升高(P均<0.05).与HFL-1 细胞比较,A549、H522、H460细胞中miR-718表达显著升高(P均<0.05).与HFL-1 exo比较,A549 exo、H522 exo、H460 exo中miR-718表达显著升高(P均<0.05),并且miR-718可靶向调控PTEN的表达.相比于si-NC组,si-PTEN组HUVEC细胞小管形成和细胞迁移数显著升高(P均<0.05).相比于A549/miR-NC exo组,A549/miR-718 mimic exo组细胞迁移和小管形成数显著增加(P均<0.05),A549/miR-718 inhibitor exo组细胞迁移和小管形成数显著减少(P均<0.05);相比于A549/miR-NC exo组,A549/miR-718 mimic exo+PTEN组细胞迁移和小管形成数显著升高(P均<0.05).结论:肺癌细胞外泌体miR-718能够通过靶向抑制PTEN的表达而促进血管生成.
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