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RT-qPCR分析拷贝数及mRNA转录水平对表达左聚糖蔗糖酶的影响

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采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因(SacB)的拷贝数及信使核糖核酸(mRNA)转录水平进行检测分析,并用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力.结果表明,在BMMY液体培养基中经甲醇诱导24 h时,样品转录水平皆达到最大值,此时多拷贝菌株转录水平(2.13)为单拷贝菌株(0.42)的5.1倍;左聚糖蔗糖酶活力在甲醇诱导24 h后均随诱导时间不断上升,多拷贝菌株酶活(13.96 U/mL)较单拷贝菌株(5.48 U/mL)提高1.5倍.重组毕赤酵母整合的左聚糖蔗糖酶基因在1～3个拷贝范围内,随着拷贝数增加,多拷贝菌株较单拷贝菌株的mRNA转录水平及相应的蛋白表达量均显著增加(P<0.05),说明毕赤酵母是表达基因SacB的良好宿主.
Effect of copy numbers and mRNA transcription on the expression of levansucrase by RT-qPCR

陈硕昌、仝秋平、郭晓磊、朱萍、蒙健宗、杨辉

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广西大学 生命科学与技术学院,广西 南宁 530004

亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西 南宁 530004

广西微生物与酶工程技术研究中心,广西 南宁 530004

实时荧光定量聚合酶链式反应 毕赤酵母 左聚糖蔗糖酶 拷贝数 转录水平

广西自然科学基金南宁市科学研究与技术开发计划

2017GXNSFAA19812820141015

2022

10.11882/j.issn.0254-5071.2022.04.013

中国酿造
中国调味品协会 北京食品科学研究院

中国酿造

CSTPCD北大核心
影响因子：0.759
ISSN：0254-5071
年,卷(期)：2022.41(4)
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