目的 探讨凋亡抑制蛋白Livin基因对肝癌Huh7细胞增值活性和放射敏感性的影响,分析可能的作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测法检测不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后肝癌Huh7细胞中Livin mRNA表达水平,通过慢病毒感染构建沉默Livin的肝癌Huh7细胞株,将对数期的肝癌Huh7细胞分为空白对照(Blank)组、阴性对照(si-NC)组和Livin沉默(si-Livin)组,采用qPCR和Western blot验证Livin沉默效果.将接受剂量为4 Gy照射的si-NC组和si-Livin组肝癌Huh7细胞分别记为si-NC+4Gy组及si-Livin+4Gy组,CCK-8法和集落形成实验检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot分析Livin信号通路相关蛋白表达水平.结果 经不同X射线照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后肝癌Huh7细胞中Livin mRNA表达水平分别为1.00± 0.10、1.18±0.11、1.76±0.15、2.51±0.24、3.94±0.35,与 0 Gy 比较,照射剂量为 4、6、8 Gy 时 Livin mRNA 表达水平显著上调,差异均有统计学意义(t=0.80、1.20、2.30,均P＜0.05).Blank组Livin mRNA和蛋白表达量分别为1.00±0.10、0.56±0.06,si-NC 组 Livin mRNA 和蛋白表达量分别为 0.95±0.11、0.55±0.05,si-Livin 组 Livin mRNA 和蛋白表达量分别为0.24±0.02、0.20±0.02.Blank组和si-NC组Livin mRNA和蛋白表达量比较差异均无统计学意义(均P＞0.05),si-Livin组Livin mRNA和蛋白表达量均明显低于si-NC组,差异均有统计学意义(t=3.25、4.17,均P＜0.05).si-NC 组、si-Livin 组、si-NC+4 Gy 组、si-Livin+4 Gy 组集落形成率分别为(95.22±3.12)％、(70.28± 4.06)％、(59.04±4.33)％、(37.81±3.80)％.与 si-NC 组比较,si-Livin 组集落形成率明显降低;与 si-NC+4 Gy 组比较,si-Livin+4 Gy组集落形成率也明显降低,上述差异均有统计学意义(t=26.01、25.02,均P＜0.05).si-NC组、si-Livin组、si-NC+4 Gy 组、si-Livin+4 Gy 组细胞凋亡率分别为(4.58±1.06)％、(19.39±2.24)％、(20.18±2.11)％、(34.69±4.52)％.与si-NC组比较,si-Livin组细胞凋亡率明显升高;与si-NC+4 Gy组比较,si-Livin+4 Gy组细胞凋亡率也明显升高,上述差异均有统计学意义(t=12.28、15.15,均P＜0.05).si-NC组、si-Livin组、si-NC+4 Gy组、si-Livin+4 Gy 组相对划痕宽度分别为(62.05±1.42)％、(47.31±1.54)％、(40.84±1.61)％、(17.06±1.29)％,穿膜细胞数分别为112.46±10.02、79.62±8.55、63.48±7.20、30.05±3.40.si-Livin组细胞相对划痕宽度和穿膜细胞数均明显低于si-NC组,差异均有统计学意义(t=24.73、39.23,均P＜0.05);si-Livin+4 Gy组细胞相对划痕宽度和穿膜细胞数均明显低于si-NC+4 Gy组,差异均有统计学意义(t=17.58、31.24,均P＜0.05).Western blot检测结果显示,si-Livin组肝癌Huh7细胞中PI3K和p-AKT蛋白表达水平明显低于si-NC组,si-Livin+4 Gy组肝癌Huh7细胞中PI3K和p-AKT蛋白表达水平明显低于si-NC+4 Gy组,上述差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 Livin siRNA抑制肝癌Huh7细胞Livin mRNA和蛋白表达,Livin可能通过PI3K/AKT信号通路影响肝癌细胞的放射敏感性.
万方数据
