摘要
目的 探究miR-485-5p对Toll样受体4(TLR-4)的靶向作用,研究其在巨噬细胞炎症反应中的调控作用.方法 合成miR-485-5p模拟物(mimics)及其抑制剂(inhibitors),分别转染HEK-293T细胞,RT-PCR检测miR-485-5p的表达水平.根据miRNA靶向作用预测数据分析选定TLR-4作为研究的靶基因,构建TLR-43'UTR及其突变体萤火虫-海肾双荧光素酶报告基因系统,通过检测在细胞模型中过表达/抑制表达miR-485-5p后对荧光素酶活力的影响,验证miR-485-5p与TLR-4之间的靶向关系,Western blot检测TLR-4蛋白质表达水平.构建巨噬细胞模型,将miR-485-5p mimics及inhibitors分别转染巨噬细胞,RT-PCR检测靶基因TLR-4 mRNA的表达水平,ELISA检测上清中下游致病因子IL-6、IL-17、IL-18的表达.结果 与对照组比较,转染miR-485-5p mimics后miR-485-5p表达水平升高,转染miR-485-5p inhibitors后miR-485-5p表达水平降低(P＜0.05).通过实验证实miR-485-5p与TLR-4存在靶向作用,细胞模型中通过过表达miR-485-5p抑制TLR-4的蛋白水平表达及mRNA相对含量,抑制下游炎性因子IL-6、IL-17、IL-18的表达(P＜0.05);抑制表达miR-485-5p,则上调TLR-4的蛋白水平及mRNA相对含量,可提高IL-6、IL-17、IL-18的释放(P＜0.05).结论 证实miR-485-5p通过对靶向TLR-4的特异性序列,抑制细胞的炎症反应.
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