目的 利用网络药理学和体外试验研究,对金银花的抗炎抗菌作用机制进行挖掘,并为其深入研究提供参考依据.方法 通过网络药理学构建了金银花抗炎抗菌蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并通过分子模拟技术进行了金银花活性成分的筛选.体外细胞试验采用LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型,通过细胞活性检测法检测不同浓度金银花提取物细胞的毒性反应;采用Griess法检测金银花提取物对细胞中一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响;荧光定量PCR法和Western blotting分别测定金银花提取物对RAW264.7细胞中关键靶标的mRNA表达量和蛋白含量的影响;免疫荧光分析检测金银花提取物对NF-κB p65的影响.结果 网络药理学研究显示,金银花抗炎抗菌的关键靶点为IL-1β、IL-6、COX-2等.分子对接结果显示,金银花中ZINC03978781、beta-sitosterol、Stigmasterol成分具有潜在的抗炎抗菌活性.体外试验结果显示,与LPS组相比,0.19,0.38,0.75,1.50 mg·mL-1的金银花提取物组RAW264.7细胞中NO的生成量均显著降低(P＜0.001);金银花提取物在0.19,0.38,0.75,1.50 mg·mL-1的浓度下能够抑制IL-1β,IL-6,COX-2 mRNA的表达(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001);在1.50 mg·mL-1的浓度下能够抑制IL-1β、IL-6蛋白的表达(P＜0.01或P＜0.001),并且抑制NF-κB p65向细胞核内的转运.结论 该结果为深入研究金银花抗炎抗菌作用及进一步合理开发利用金银花提供了实验依据.
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