目的 选用乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)为脑靶向配体,构建受体介导的Lf修饰党参多糖脂质体(lactoferrin-modified liposomes of Codonopsis pilosula polysaccharide,Lf-CPPS-LCL),并考察其体外跨越血脑屏障的能力及抗炎作用.方法 通过逆向蒸发法制备党参多糖脂质体(CPPS-Lips),以包封率为考察指标采用星点设计-响应面法筛选最优处方,利用Lf的氨基与脂质体膜表面DSPE-PEG2000-COOH共价结合,组装得到Lf-CPPS-LCL,并对其形态、粒径电位,以及体外释放情况进行考察;通过人脐静脉内皮细胞与大鼠脑胶质瘤C6细胞共培养建立体外血脑屏障模型,考察Lf-CPPS-LCL的透过能力;采用脂多糖诱导BV2细胞造成炎症模型,分别给予CPPS、CPPS-Lips和Lf-CPPS-LCL进行药物干预,通过ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β 和 IL-6 的含量,应用 Western blotting法测定 BV2 细胞 Toll 样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达水平.结果 确定最优处方为脂药比31 ∶1,大豆磷脂∶胆固醇=28∶5,超声时间 25 min,DSPE-PEG2000 的摩尔含量为 5％.制得的 Lf-CPPS-LCL 的粒径为(197.5±0.6)nm,PDI 为(0.2±0.02),Zeta 电位为(-18.8±1.1)mV,Lf-CPPS-LCL与原料药相比体外释放更加缓慢平稳.经Lf修饰后的脂质体与未修饰的脂质体相比对血脑屏障模型有更好的透过性;与模型组相比,Lf-CPPS-LCL能明显抑制炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6释放,下调BV2细胞TLR4、NF-κB、MyD88的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 制得的Lf-CPPS-LCL形态圆整、粒径分布均匀、有较好的缓释作用及血脑屏障模型透过能力,Lf-CPPS-LCL可有效抑制脂多糖诱导的BV2炎症反应,其作用机制可能与下调TLR4及其下游的MyD88、NF-κB蛋白表达相关.
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