摘要
本研究旨在探究TNC(Tenascin-C)基因敲除对绵羊子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)迁移功能的影响及其内在信号通路,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供借鉴.在TNC外显子 3 和 5 设计和筛选高活性sgRNA,转染绵羊EECs后,通过PCR和RT-PCR鉴定出TNC 6.1 kb片段缺失的绵羊EECs,即plate 1-G3 和plate 2-B5.通过划痕实验检测plate 1-G3 和plate 2-B5 迁移功能变化,并通过RNA-seq和生物信息学分析筛选共差异表达基因(co-Differentially Expressed Genes,co-DEGs),进行GO分析、KEGG分析以及PPI分析.结果表明,TNC基因敲除促进了绵羊EECs的迁移,通过RNA-seq和生物信息学分析筛选出 2 326 个co-DEGs,包括 1 304 个上调co-DEGs和 1 022 个下调co-DEGs.GO分析显示,co-DEGs富集到细胞迁移、粘附、细胞-底物连接等.KEGG分析显示,co-DEGs富集在PI3K-Akt信号通路、ECM-受体相互作用、Rap1 信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等.GO条目中 225 个迁移相关co-DEGs的KEGG分析也富集到类似信号通路.迁移相关DEGs的PPI分析显示,中心枢纽基因有PIK3R3、FN1、FGFR1、ITGB3、PDGFRA等.TNC基因敲除导致绵羊EECs的迁移功能增强并揭示了其相关通路和关键基因,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供了新思路.
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