首页|基于Fosmid文库筛选山羊瘤胃源酯类水解酶基因及其原核表达验证

基于Fosmid文库筛选山羊瘤胃源酯类水解酶基因及其原核表达验证

扫码查看
原文链接
  • 国家科技期刊平台
  • NETL
  • NSTL
  • 万方数据
试验旨在挖掘瘤胃微生物中潜在的酯类水解酶基因并进行原核表达，研究其酶学性质及对芥子碱的降解效果。利用功能筛选方法，从前期构建的山羊瘤胃微生物Fosmid文库中鉴定出潜在的酯类水解酶基因，并在大肠杆菌中异源表达，通过酶活测定及芥子碱的降解研究来筛选功能酶，最后分析酯类水解酶的酶学性质。结果表明:从山羊瘤胃微生物Fosmid文库中鉴定到 6 个酯类水解酶基因Estg1、Estg2、Esty1、Estp、Estk1和Estk2，并在E。coli BL21(DE3)中成功表达，获得的酯类水解酶的活性均高于空载对照(P<0。05)，其中Estp和Estk1 的活性最高，分别为 205。33 U/mL和 212。67 U/mL，其分子量为 33、28 ku，且能够降解芥子碱，降解率分别为 13。26%和 11。66%;酯酶Estp和Estk1 在温度为 40℃、pH 11 时活性最高，在 40～50℃、pH 8～11 条件下相对稳定;金属离子Mn2+和Ni2+对酯酶Estp和Estk1 的活性有促进作用(P<0。01)，有机溶剂正己烷能增强其活性(P<0。05);而EDTA、金属离子Cu2+、Zn2+、Co2+和Fe3+、有机溶剂乙腈以及表面活性剂吐温-80 和曲拉通X-100 会抑制Estp和Estk1 的活性(P<0。01)。本研究从山羊瘤胃宏基因组文库中筛选了 2 个高产酯类水解酶的基因，异源表达后具有嗜中温、耐碱、耐有机溶剂等特性，且能够降解芥子碱，可为酯类水解酶的深入挖掘及应用提供理论依据。

李林芳、刘功炜、杨凯尧、王智伟、崔雯元、杨雨鑫

展开 >

西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌 712100

Fosmid文库 酯类水解酶 原核表达 酶学性质 芥子碱

国家重点研发计划国家重点研发计划陕西省重点研发计划陕西省重点研发计划国家绒毛用羊产业技术体系

2022YFD13002012021YFD 16007042021ZDLNY05-022023-YBNY-105CARS-39-12

2024

10.19556/j.0258-7033.20230303-01

中国畜牧杂志
中国畜牧兽医学会

中国畜牧杂志

CSTPCD北大核心
影响因子：0.704
ISSN：0258-7033
年,卷(期)：2024.60(2)
  • 34