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绵羊手工克隆关键技术流程优化

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手工克隆技术(Handmade Cloning，HMC)是一种不需要显微操作仪的更为方便的克隆方法，但是其对于操作人员的要求更加严格。本文着重于对透明带消化时间、融合时间、供核类型、代数、饥饿与否几个关键节点进行优化。结果表明:链霉蛋白酶消化时间在 70～105 s之间死亡率极显著低于处理时间大于 105 s组(3。1%vs。25。1%)，胞质碎裂率极显著低于处理时间小于 75 s组(2。1%vs。72。0%)。另外，供核细胞为P0～P1 代时，囊胚率极显著低于饥饿 48 h或 0 h的P2～P5 代供核细胞(24%vs。40。1%、39。8%)。在融合率方面，随着操作时间的加长，累加平均融合率呈现降低趋势。在供核的选择方面，使用脐带间充质干细胞获得的囊胚率极显著高于耳缘成纤维细胞(40。4%vs。21。8%)。由此可见，绵羊HMC法克隆过程中，使用链酶蛋白酶处理 75～105 s，融合时间控制在 115 min之内，使用代数大于P2 的间充质干细胞能够获得较高的囊胚率。

李伟建、李卓、赵茜、艾日夏提·地里夏提、刘娅兰、马秀玲、王莉、王旭光

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新疆农业大学动物科学学院,新疆乌鲁木齐 830052

绵羊 体细胞核移植 手工克隆 链霉蛋白酶 脐带间充质干细胞

新疆维吾尔自治区自然科学基金项目

2020D01A56

2024

10.19556/j.0258-7033.20230425-01

中国畜牧杂志
中国畜牧兽医学会

中国畜牧杂志

CSTPCD北大核心
影响因子：0.704
ISSN：0258-7033
年,卷(期)：2024.60(3)
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