摘要
手工克隆技术(Handmade Cloning,HMC)是一种不需要显微操作仪的更为方便的克隆方法,但是其对于操作人员的要求更加严格.本文着重于对透明带消化时间、融合时间、供核类型、代数、饥饿与否几个关键节点进行优化.结果表明:链霉蛋白酶消化时间在 70～105 s之间死亡率极显著低于处理时间大于 105 s组(3.1%vs.25.1%),胞质碎裂率极显著低于处理时间小于 75 s组(2.1%vs.72.0%).另外,供核细胞为P0～P1 代时,囊胚率极显著低于饥饿 48 h或 0 h的P2～P5 代供核细胞(24%vs.40.1%、39.8%).在融合率方面,随着操作时间的加长,累加平均融合率呈现降低趋势.在供核的选择方面,使用脐带间充质干细胞获得的囊胚率极显著高于耳缘成纤维细胞(40.4%vs.21.8%).由此可见,绵羊HMC法克隆过程中,使用链酶蛋白酶处理 75～105 s,融合时间控制在 115 min之内,使用代数大于P2 的间充质干细胞能够获得较高的囊胚率.
基金项目
新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2020D01A56)
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