摘要
为探究山羊原代软骨细胞的体外分离培养和鉴定方法,本实验采用胰蛋白酶与II型胶原酶相结合的消化方法分离山羊原代软骨细胞.使用倒置显微镜观察并拍摄 1、3、5、7 d共 4 个时期的细胞形态;利用血球计数板对细胞计数并绘制生长曲线;RT-qPCR法检测山羊软骨细胞标志性基因;通过甲苯胺蓝染色法和II型胶原免疫荧光染色法对软骨细胞进行鉴定.结果显示:细胞形态由透亮的圆点逐渐变为三角形、短梭形等形态,最终转变为体积较大,形态圆润的多边形;细胞计数结果显示,1～7 d细胞数量逐渐增加,7 d达到峰值,7～11 d细胞数量逐渐减少.Acan和Col II基因mRNA相对表达量随细胞培养时间的延长而降低,MMP13基因mRNA相对表达量逐渐升高.甲苯胺蓝染色和II型胶原免疫荧光染色结果均为阳性.由以上结果可知,本实验成功获得大量活力良好的山羊软骨细胞,并建立山羊软骨细胞体外分离及培养的方法,为进一步研究山羊软骨相关体外试验提供参考.
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