本实验旨在探究Mic60 在小鼠卵母细胞体外成熟中的作用.选取 4～6 周龄的雌性C57BL/6J小鼠,注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后采集卵母细胞并随机分为对照组和Mic60 抑制组(包括 50、100、130、150 μmol/L组,Miclxin组为130 μmol/L).卵母细胞体外培养16 h后,通过免疫荧光染色检测纺锤体形态、ROS水平、线粒体分布和质量,利用qPCR检测抗氧化基因表达、线粒体呼吸链亚基的表达、整合应激反应相关基因的表达.结果表明:与对照组相比,130 μmol/L Mic60 抑制剂会降低卵母细胞体外成熟率(78.29%vs.21.08%,P<0.01),并显著阻碍纺锤体的组装;与对照组相比,Miclxin组卵母细胞中的ROS水平升高(P<0.05),且Sod1(0.83 vs.0.22)和Sod2(0.84 vs.0.27)基因表达降低(P<0.05),线粒体分布异常比例升高(0.16 vs.0.57,P<0.05),线粒体膜电位水平降低(1.61 vs.1.05,P<0.05),ATP产生降低(1.16 vs.0.79,P<0.05);Miclxin组卵母细胞线粒体呼吸链复合体亚基Ndufv2和Sdha表达降低(P<0.05),Cyc1 表达升高(P<0.05),卵母细胞mtDNA拷贝数降低(19 324 vs.9 066,P<0.05);与对照组相比,Miclxin组卵母细胞Oma1、Dele1、Eif2ak1、eIF2α基因表达上调(P<0.05),触发了整合应激反应(Integrated Stress Response,ISR)并上调了ISR主要效应因子Atf4、Atf5和Chop的表达(P<0.05).可见,抑制Mic60 会通过损害线粒体功能并触发ISR影响卵母细胞体外成熟效果.
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