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干扰牛Zfy基因的载体构建及其在细胞水平上的效果验证

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重组载体可以靶向干扰公牛睾丸中Zfy基因的表达，从而影响Y精子的发育和形成过程，引起睾丸中X、Y精子的比例发生偏移。本试验用pLL3。7 质粒重组构建 3 个牛Zfy基因mRNA干扰载体，即pLL3。7/a、pLL3。7/b、pLL3。7/c。同时设置空白对照(等体积生理盐水)、空载体(无干扰片段)等作为对照组，建立生殖细胞系的体外培养体系，用脂质体 2000 将质粒载体转染到生精细胞，运用RT-qPCR、免疫印迹(Western Blot，WB)方法从细胞水平上筛选出效果最佳的干扰载体。结果表明，同对照组相比，pLL3。7/a能使Zfy基因mRNA表达水平下降 68。65%±7。25%(P<0。01);pLL3。7/c能使Zfy基因mRNA表达水平下降 23。36%±3。67%(P<0。05);pLL3。7/b能使Zfy基因mRNA表达水平下降 11。01%±2。14%(P>0。05)。WB试验与RT-qPCR检测结果一致，因此，pLL3。7/a干扰效果最佳。本研究结果将为从基因层面实现性别控制技术的研发和奶牛养殖业的发展提供技术支撑。

席继锋、王香祖、张永生、李超程、贾斌、杨楠

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新疆农业职业技术学院,新疆昌吉 831100

石河子大学动物科技学院,新疆石河子 832003

新疆天山畜牧生物育种有限公司,新疆昌吉 831100

牛 Zfy基因 干扰 载体 生殖细胞

新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目(2021)新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目(2021)

2021D01A1102021D01A111

2024

10.19556/j.0258-7033.20230416-01

中国畜牧杂志
中国畜牧兽医学会

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CSTPCD北大核心
影响因子：0.704
ISSN：0258-7033
年,卷(期)：2024.60(6)
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