摘要
牛骨骼肌卫星细胞是一种多功能干细胞,能修复受损的骨骼肌.蛋白质二硫键异构酶PDIA3在肌肉再生过程中起关键作用.本试验旨在研究PDIA3 对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的影响.利用牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,设计合成PDIA3的干扰模型,并构建PDIA3的过表达载体pcDNA3.1-PDIA3,检测其干扰和过表达效果.采用EdU染色法检测PDIA3 表达量的改变对细胞增殖的影响,通过肌管形成状态检测对分化进程的影响,并采用RT-qPCR和Western Blot方法检测牛骨骼肌卫星细胞在RNA水平和蛋白水平上增殖标志因子和分化标志因子的变化,综合分析干扰和过表达PDIA3对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响.结果显示:与对照组相比,干扰或过表达PDIA3后Pax7 在mRNA和蛋白表达水平均无明显变化,EdU阳性细胞率无明显变化,表明PDIA3表达水平的改变对其增殖无明显影响.干扰PDIA3后,可发现肌管数量明显少于对照组,肌管直径明显变小,分化标志因子MyHC的RNA表达水平极显著降低,MyHC的蛋白表达水平显著降低;而过表达PDIA3后,可发现肌管数量明显多于对照组,肌管直径明显变大,且分化标志因子MyHC的RNA表达水平和蛋白水平均显著升高.以上结果表明PDIA3能正向调节牛骨骼肌卫星细胞的分化过程.本研究结果为PDIA3 在肌肉发育的研究提供了一定的参考.
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