呕吐毒素体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞对炎性因子和m6A甲基化相关基因表达的影响

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中文摘要：本实验构建了呕吐毒素(DON)体外刺激 3D4/21 猪肺泡巨噬细胞模型，研究DON刺激 3D4/21 猪肺泡巨噬细胞对炎性因子IL-6、IL-8和m6A甲基化修饰相关基因METTL3、METTL14、FTO、WTAP和YTHDF2表达的影响。利用 2 μmol/L的DON刺激细胞 24 h和 48 h，收集不同时间点细胞样品的总RNA和总蛋白，通过实时荧光定量PCR检测炎性因子和m6A修饰相关基因表达水平的变化，并利用蛋白免疫印迹法(WB)检测METTL3 和FTO蛋白的表达水平变化。结果表明:2 μmol/L的DON刺激 3D4/21 猪肺泡巨噬细胞 24 h和 48 h后，炎性细胞因子IL-6、IL-8的相对表达量均上调(P<0。01);与对照组相比，METTL3基因的mRNA转录水平均上调(P<0。05)，FTO基因的mRNA转录水平均下调(P<0。05)，METTL14基因仅在 24 h后上调(P<0。05)，而WTAP和YTHDF2基因在DON刺激细胞 24 h和 48 h后均无显著变化。蛋白免疫印迹分析结果显示，METTL3蛋白在48 h后上调(P<0。05)，而FTO蛋白在24 h和48 h均下调(P<0。05)。以上结果表明，DON刺激 3D4/21 猪肺泡巨噬细胞可引起细胞内炎性因子的表达增加，且m6A甲基化修饰相关基因METTL3的上调和FTO的下调可能与细胞炎症相关。此外，对DON组小鼠腹腔注射 5 mg/kg BW DON，对照组注射等体积的磷酸盐缓冲液。3 h后检测小鼠肺脏组织中m6A甲基化修饰相关基因的表达情况，与对照组相比，肺脏组织中m6A甲基化相关基因METTTL3、METTL14、WTAP、YTHDF2均无显著差异;FTO下调(P<0。001)。蛋白免疫印迹分析结果显示:在DON刺激小鼠 3 h后FTO蛋白下调(P<0。01)，表明DON在动物体内也表现出相似的效应。

作者：

丰伟丽、薛智慧、赵庆博、周焕焕、周傲、刘玉兰、张晶

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作者单位：

武汉轻工大学动物科学与营养工程学院,农副产品蛋白质饲料资源教育部工程研究中心,湖北武汉 430023

关键词：

呕吐毒素 3D4/21 猪肺泡巨噬细胞鼠 m6A甲基化炎症

基金：

湖北省教育厅重点项目

项目编号：

D20221603

出版年：

2024

DOI：

10.19556/j.0258-7033.20230914-02

中国畜牧杂志

中国畜牧兽医学会

中国畜牧杂志

CSTPCD北大核心

影响因子：0.704

ISSN：0258-7033

年,卷(期)：2024.60(7)

参考文献量25