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猪SPACA4蛋白的原核表达与多克隆抗体的制备

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本研究旨在制备公猪精子顶体蛋白 4(Sperm Acrosome Associated 4，SPACA4)的多克隆抗体(Polyclonal antibody，PAb)，以期为揭示猪SPACA4 蛋白参与精子受精过程的分子机制提供试验材料。从GeneBank上选取公猪SPACA4基因序列(登录号:NM_001177929。1)编码区，去掉信号肽与终止子，克隆至pET-SUMO表达载体并转化E。coli Rosstta(DE3)感受态细胞，经 1 mol/L IPTG诱导表达及亲和层析纯化后获得重组SPACA4 蛋白。将重组蛋白免疫小鼠制备SPACA4 PAb，使用间接ELISA检测抗体效价，并利用Western Blot法验证SPACA4 PAb对公猪精子天然蛋白的特异性。重组质粒pET-SUMO-SPACA4 能被IPTG诱导表达，主要以包涵体形式存在，SUMO-SPACA4 重组蛋白相对分子质量约为 25 KDa，鼠源SPACA4 PAb能特异性结合重组蛋白，最高效价为 1:2 048 000。经Western Blot法检测，SPACA4 PAb能识别天然SPACA4 蛋白。本研究利用原核表达系统成功制备出效价高、特异性好的公猪SPACA4 PAb，并能应用于识别天然SPACA4 蛋白，为SPACA4基因的功能和应用研究提供素材。

曾繁文、王明明、朱雪丹、李莉、卫恒习、张守全

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广州动物园,广州市野生动物研究中心,广东广州 510075

华南农业大学动物科学学院,广东广州 510642

公猪 精子顶体蛋白4(SPACA4) 原核表达 多克隆抗体

广东省现代农业产业体系生猪创新团队

2022KJ126

2024

10.19556/j.0258-7033.20231205-07

中国畜牧杂志
中国畜牧兽医学会

中国畜牧杂志

CSTPCD北大核心
影响因子：0.704
ISSN：0258-7033
年,卷(期)：2024.60(8)