摘要
本研究旨在制备公猪精子顶体蛋白 4(Sperm Acrosome Associated 4,SPACA4)的多克隆抗体(Polyclonal antibody,PAb),以期为揭示猪SPACA4 蛋白参与精子受精过程的分子机制提供试验材料.从GeneBank上选取公猪SPACA4基因序列(登录号:NM_001177929.1)编码区,去掉信号肽与终止子,克隆至pET-SUMO表达载体并转化E.coli Rosstta(DE3)感受态细胞,经 1 mol/L IPTG诱导表达及亲和层析纯化后获得重组SPACA4 蛋白.将重组蛋白免疫小鼠制备SPACA4 PAb,使用间接ELISA检测抗体效价,并利用Western Blot法验证SPACA4 PAb对公猪精子天然蛋白的特异性.重组质粒pET-SUMO-SPACA4 能被IPTG诱导表达,主要以包涵体形式存在,SUMO-SPACA4 重组蛋白相对分子质量约为 25 KDa,鼠源SPACA4 PAb能特异性结合重组蛋白,最高效价为 1:2 048 000.经Western Blot法检测,SPACA4 PAb能识别天然SPACA4 蛋白.本研究利用原核表达系统成功制备出效价高、特异性好的公猪SPACA4 PAb,并能应用于识别天然SPACA4 蛋白,为SPACA4基因的功能和应用研究提供素材.
基金项目
广东省现代农业产业体系生猪创新团队(2022KJ126)
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