摘要
本研究通过敲低circRNA-13096 后利用CCK8、ELISA技术检测细胞增殖和孕酮水平,利用RT-qPCR技术分析卵泡发育相关基因的表达水平变化,并利用生物信息学技术预测circRNA-13096 结合的miRNA,通过RNAhybrid预测以及双荧光素酶验证circRNA-13096 与miR-24-3p结合位点;利用KOBAS网站分析miR-24-3p靶基因及富集的信号通路.结果显示:敲低circRNA-13096 后促进了颗粒细胞增殖和孕酮分泌(P<0.05);STAR和CYP11A1基因表达水平上升(P<0.05),而FST表达水平下降(P<0.05);双荧光素酶结果显示,野生型circRNA-13096 与miR-24-3p共转染荧光素酶活性降低(P<0.05);miR-24-3p mimic转染细胞可促进孕酮水平提高(P<0.05),通过miRDB和targetScan预测miR-24-3p靶基因,共预测到 87 个交集靶基因,富集在多个重要生物过程中,其中最显著的信号通路是MAPK信号通路(P<0.05).由此可见,circRNA-13096 在颗粒细胞中通过与miR-24-3p结合后发挥调控鸡卵泡颗粒细胞的增殖和孕酮分泌.
基金项目
江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室开放课题(AGBMD202002)
江苏省自然科学基金(BK20181217)
江苏省重点研发计划(现代农业)专项(BE2021380)
江苏省种业振兴揭榜挂帅项目(JBGS[2021]104)
现代农业产业技术体系建设专项(CARS-40-K01)
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