摘要
本研究旨在克隆乌蒙乌骨鸡酪氨酸酶(TYR)基因启动子区序列并解析其分子结构特征,为探究该基因调控乌蒙乌骨鸡乌质性状的分子机制提供参考.以乌蒙乌骨鸡血液基因组DNA为模板,设计 3 对特异性引物,通过PCR扩增、Sanger测序及序列拼接方法获得TYR基因启动子区序列;采用DNAStar Lasergene和MEGA 5.0 软件分别进行 15 个物种TYR基因启动子区序列相似性分析及系统进化树构建;利用生物信息学软件预测分析该序列核心启动子、调控元件、转录因子和CpG岛等分子结构特征.结果显示,乌蒙乌骨鸡TYR基因启动子区序列长 3 216 bp(Genbank登录号:ON49713457),包括 5'侧翼区 2 858 bp和 358 bp部分外显子 1.乌蒙乌骨鸡与其他 14 个物种TYR基因相似性为 40.9%～99.9%,乌蒙乌骨鸡与原鸡、鹌鹑等鸡形目亲缘关系较近,与猪亲缘关系较远.-600～-59 bp可能为乌蒙乌骨鸡TYR基因候选核心启动子区域,5'侧翼区-523 bp处可能存在 1 个转录起始位点C,存在 1 个CAAT-box、3 个TATA-box、16 个E-box、2 个进化保守区域CR1 和CR2、5 个 5'侧翼区近端黑色素细胞特异性元件(p-MSE),不存在CpG岛.乌蒙乌骨鸡TYR基因启动子区存在潜在的C/EBP-α、GATA-1、Sp1、Pdx1、TBP和NF-1 等转录因子.本研究成功克隆获得乌蒙乌骨鸡TYR基因启动子区序列,为解析该基因调控乌蒙乌骨鸡乌质性状的分子机制提供了理论依据.
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