摘要
本试验以 7 日龄仔猪作为体内试验研究对象,以猪肺泡巨噬细胞 3D4/21 作为体外试验研究对象,通过体内外结合的研究方法来探究葛根素(Puerarin,PR)对猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)感染仔猪肝脏和腓肠肌以及 3D4/21 巨噬细胞基因表达的影响.将 30 头体重均匀的 7 日龄仔猪随机分为Control组、PEDV组以及PEDV+PR[0.5 mg/(kg BW·d)]组.预试期3 d,正试期12 d.结果显示:PR干预回调了肝脏的OASL、ISG15、IL-6、IL-1β、TNFα、PPAR-γ、SLC27A2、APOA4、LPL、ASS1、ARG1基因(P<0.05),腓肠肌的PEDV-N、OASL、ISG15、IL-6、IL-1β基因的相对表达量(P<0.05);体外不同浓度梯度(0、0.5、1、5、10、20 μmol/L)细胞活力实验结果显示,添加 5 μmol/L和 10 μmol/L的PR对 3D4/21 细胞生长都有促进作用(P<0.05),其中 5 μmol/L对细胞促进作用最佳.将 3D4/21 细胞分为2 个方式处理:①PR(5 μmol/L)预处理细胞 3 h后加PEDV吸附,再更换为含PR(5 μmol/L)培养液作用12 h和 24 h,即全时添加;②PEDV吸附细胞后,更换为含PR(5 μmol/L)培养液作用 12 h和 24 h,即感染后添加;每个处理组再分为Control组、PEDV组以及PEDV+PR组.结果显示:与PEDV组相比,全时添加PR下调了 3D4/21 细胞PEDV-N基因的相对表达量(P<0.05),感染后添加PR培养 12 h上调了 3D4/21细胞PEDV-N基因的相对表达量(P<0.05);与PEDV组相比,全时添加PR下调了MX1、ISG15、IFN-β、IFITM1、IFITM3基因的相对表达量(P<0.05);感染后添加PR均下调了MX1、ISG15、IFN-β、IFITM1、IFITM3基因的相对表达量(P<0.05).以上结果表明,PR干预能影响仔猪肝脏的抗病毒与炎性、脂质代谢和精氨酸代谢基因的表达、腓肠肌抗病毒与炎性基因的表达;PR浓度为5 μmol/L时3D4/21细胞的存活率最高;PR干预可以影响PEDV感染 3D4/21 细胞免疫、抗病毒与炎性相关基因的表达,可以抑制PEDV在 3D4/21细胞里的复制.
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