目的 探究半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1R)对体外培养的APPswe/PS1∆E9双转基因小鼠(APP/PSI小鼠)皮质原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制.方法 ①将携带CysLT1R的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT1R-EGFP)或空载体(LV-EGFP)转染至APP/PS1小鼠皮质原代神经元,使神经元过表达CysLT1R(CysLT1R-OE),采用Western印迹法检测神经元CysLT1R蛋白表达水平.②分别以CysLT1R激动剂YM17690(1μmol·L-1)单用或与CysLT1R拮抗剂普仑司特(Pran 1μmol·L-1)联用处理CysLT1R-OE神经元12 h;采用ELISA检测细胞培养基内Aβ1-40和Aβ1-42水平;Western印迹法检测神经元中淀粉样前体蛋白(APP)、β淀粉样前体蛋白切割酶1(BACE1)、早老素(PS)1和PS2表达水平.以YM17690(1μmol·L-1)单用或与Pran(1μmol·L-1)联用处理CysLT1R-OE神经元2 h后,采用Western印迹法检测CysLT1R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布.③采用渗透差法在CysLT1R-OE神经元中导入核定位序列多肽(NLS-pep,10 g·L-1)竞争性抑制CysLT1R核转位或阴性对照多肽(NON-pep,10 g·L-1),随即以YM17690(1μmol·L-1)处理CysLT1R-OE神经元12 h,采用Western印迹法检测CysLT1R激活后细胞培养基内Aβ水平、胞质中APP和BACE1表达水平;以YM17690(1μmol·L-1)处理导入多肽后的CysLT1R-OE神经元2 h,采用Western印迹法检测CysLT1R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布.结果 ①CysLT1R-OE神经元CysLT1R蛋白表达水平较对照组显著增加(P<0.01).② 与CysLT1R-OE组相比,CysLT1R-OE+YM17690组神经元分泌Aβ1-40和Aβ1-42显著增加(P<0.05),胞质中BACE1及细胞核中CysLT1R和NF-κB P65亚基表达水平显著增加(P<0.05),而神经元中APP,PS1和PS2表达水平无明显改变.YM17690和Pran联用(CysLT1R-OE+YM17690+Pran组)可消除上述改变.③ 与CysLT1R-OE+YM17690组相比,CysLT1R-OE+NLS-pep+YM17690组CysLT1R和NF-κB P65亚基在细胞核内的表达水平显著下降(P<0.05),神经元分泌Aβ1-40和Aβ1-42显著下降(P<0.05),胞质中BACE1表达水平下调(P<0.05),APP未见显著改变.结论 CysLT1R被激活后,通过上调BACE1表达从而促进Aβ的生成,其机制可能是通过CysLT1R发生核转位并激活NF-κB信号通路介导.
万方数据
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