目的 利用膜电位检测原理,构建一种靶向γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)的药物高通量筛选模型.方法 采用α1β2γ2L-GABAAR-CHO细胞株构建GABAAR药物高通量筛选方法;分别以工具化合物的50％激动效应浓度(EC50)和EC80浓度下的激活值(ASV)和Z′因子作为判定指标,对缓冲液反应体系、激动剂GABA激活浓度、染料种类和染料孵育时间进行优化选择;在优化条件下分别利用激动剂GABA(0.05,0.25和1.00μmol·L-1)、阳性变构剂地西泮(Dia,1,5和30μmol·L-1)和拮抗剂加巴嗪(gabazine,Gab,0.1,1.0和10.0μmol·L-1)进行方法稳定性考察;通过工具化合物GABA,Dia和Gab的剂量-效应关系检测,考察方法灵敏度.结果 构建的方法分别实现了对不同药理性质化合物GABA,Dia和Gab的特异性检测;通过方法优化获得的优化条件为:在GABA EC20～EC50激活浓度下,采用5μL含氯体系加样,对使用红色染料孵育30～50 min的GABAAR-CHO细胞进行工具化合物检测;对不同浓度GABA,Dia和Gab检测的CV％分别介于4.09％～15.30％,5.59％～8.30％和5.65％～15.64％;通过对3种工具化合物的剂量-效应关系检测,获得GABA和Dia的EC50值分别为(137.4±26.3)nmol·L-1和(3.5±0.7)μmol·L-1,Gab的50％抑制效应浓度为(164.9±36.6)nmol·L-1.结论 本研究建立并优化了高通量检测方法,该方法特异性好、精密度高、稳定可靠、灵敏度高,为靶向GABAAR的先导化合物发现提供了良好的技术基础.
万方数据
维普
